日本乙型脑炎病毒ELISA抗体检测试剂盒的研制及初步应用

采用日本乙型脑炎病毒单克隆抗体预包被酶标板,将纯化的日本乙型脑炎病毒(JEV)作为检测用抗原,利用包被捕获法建立了用于检测猪乙型脑炎抗体的间接ELISA法。采用建立的ELISA法对50份已知阴性血清样本检测,临界OD450nm值为0.343,ELISA与IFA对200份血清进行平行检测,总符合率为92.9%,与商品化的同类国产试剂盒的符合率为95%。与其他常见的猪病毒阳性血清抗体无交叉反应,2~8℃保存12个月稳定。研制的ELISA抗体检测试剂盒为临床JEV血清抗体检测及其疫苗的免疫效果评价提供了技术手段。     

RP-HPLC测定木槟硝黄散中木香烃内酯、去氢木香内酯的含量

建立了RP-HPLC法测定木槟硝黄散中木香烃内酯与去氢木香内酯含量的方法。用十八烷基键合硅胶柱分离木槟硝黄散中木香烃内酯与去氢木香内酯,以甲醇-水(60∶40)为流动相,检测波长225 nm。木槟硝黄散中木香烃内酯与去氢木香内酯的线性范围分别为4.14~41.4μg/m L和3.59~35.9μg/m L,平均回收率分别为99.23%、99.00%(n=6)。该方法简便、快速,可用于木槟硝黄散中木香烃内酯与去氢木香内酯的含量测定。     

猪繁殖与呼吸综合征疫苗的研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的严重危害世界养猪业的一种传染病,该病可造成猪的繁殖障碍、呼吸系统病症与生长受阻。本文着眼于PRRSV疫苗的免疫原性、保护效力和安全性,涉及市场上现有的商品化疫苗与已报道的处于试验阶段的相关疫苗研究成果,以期为PRRSV的防控与疫苗研发提供有益的参考。     

Genetic parameters for litter size,piglet growth and sow's early growth and body composition in the Chinese–European line Tai Zumu

Genetics of piglet growth in association with sow's early growth and body composition were estimated in the Tai Zumu line. Piglet and sow's litter growth traits were calculated from individual weights collected at birth and at 3 weeks of age. Sow's litter traits included the number of piglets born alive (NBA), the mean piglet weight (MW) and the standard deviation of weights within the litter (SDW). Sow's early growth was measured by the age at 100 kg (A₁₀₀), and body composition included backfat thickness (BF₁₀₀). A main objective of this study was to estimate separately the direct genetic effect (d) and the maternal genetic effect (m) on piglet weight and daily weight gain during lactation. Variance components were estimated using the restricted maximum likelihood methodology based on animal models. The heritability estimates were 0.19 for NBA, 0.15 and 0.26 for SDW and MW at 3 weeks and 0.42 and 0.70 for A₁₀₀ and BF₁₀₀. The NBA was almost independent from SDW. Conversely, the A₁₀₀ and BF₁₀₀ were correlated unfavourably with SDW (r_g<−0.24, SE<0.12). A stronger selection for litter size should have little effect on litter homogeneity in weights. Selection for lean growth rate tends to favour heterogeneity in weights. The direct effect on piglet weight at birth and daily weight gain accounted for 12% (h² (d) = 0.02) and 50% (h² (d) = 0.11) of the genetic variance, respectively. The association between d and m for piglet weight was not different from zero at birth (r_g = 0.19, SE = 0.27), but a strong antagonism between d and m for daily weight gain from birth to 3 weeks was found (r_g = −0.41, SE = 0.17). Substantial direct and maternal genetic effects influenced piglet growth until weaning in opposite way.     

不同种植密度条件下单混种作物的生长曲线

代谢比例理论(Metabolic Scaling Theory)认为,植物小个体或幼苗的生物量和物质能量代谢速率之间的异速生长指数为1,而随着植物个体的逐渐增大,其代谢异速生长指数逐渐趋近于3/4。2012年,Deng等基于代谢比例理论建立了植物小个体的动态生长模型。然而,对于受到种内或种间不同竞争压力的植物个体来说,其生长过程无疑将受到邻体竞争的影响,他们是否仍然遵循上述植物小个体的动态生长模型尚不得而知。本研究针对此科学问题选取了春小麦(Triticum aestivum)、胡麻(Linum usitisimum)、玉米(Zea mays)3种作物分别进行两两组合混合种植以及单独种植,种植密度分别为高、中、低3种不同密度梯度;在作物出苗至成熟期间,分别对株高、基茎、冠幅、生物量、以及不同时期样方植物密度共进行6次跟踪测定。通过对Deng等建立的植物小个体动态生长模型的拟合分析,发现在种植密度梯度下不论单种还是混种,其植物个体的生长曲线均符合植物小个体动态生长模型,且具有相似生态位的物种混种条件下的个体生长状况要好于单种条件下的个体生长状况,而低密度条件下的生长状况亦显著优于中、高密度个体生长状况。总之,不同竞争压力下的植物个体,其生长速率和成熟大小虽有所变化,但其生长曲线均符合上述生长模型的预测。该研究不但对植物小个体生长模型和代谢理论的可靠性进行了进一步的验证,而且还使该理论的应用与发展得到进一步的完善。     

兽药广告宣传中的中西方文化差异分析

介绍了中西方兽药广告宣传的各种表现形式,分析了中西方文化差异对兽药广告宣传的影响,提出了我国兽药广告宣传在融合中西方文化的同时,要多学习西方优秀作品的创意,使之相互融合、相互渗透的发展建议,从而推动我国优秀的兽药企业及兽药产品走向世界。     

7株牛源A型巴氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析

对2014年沈阳地区患有呼吸系统疾病的育肥牛场进行病原分离,得到7株分离菌,对其进行培养形态及染色观察、病理组织切片观察、动物致病性观察及16S序列分析,初步鉴定为牛多杀性巴氏杆菌(Pm)。利用Pm种特异性引物及荚膜血清特异性引物进行PCR扩增,均得到目的基因条带。对分离菌进行药敏试验的结果显示,5株分离菌株已对阿米卡星、新诺明产生较强耐药性;7株分离菌均对氟苯尼考、恩诺沙星、四环素及氨苄西林敏感。由此确定,分离菌株均为牛荚膜A型巴氏杆菌,且已具有一定耐药性。     

高效液相色谱法测定婴儿配方奶粉中乳铁蛋白含量.

本研究建立了一种用高效液相色谱测定婴儿配方奶粉中乳铁蛋白的方法。色谱条件:色谱柱为Hi Trap Heparin肝素琼脂糖亲和柱(0.7×2.5cm,1m L),流动相A为50mmol/L的Na2HPO4溶液(p H7.00),流动相B为50mmol/L的Na2HPO4+1.0mol/L的Na Cl溶液(p H7.00),检测波长为230nm。结果表明:乳铁蛋白的检出限为3.0mg/100g,回收率在86%~99%之间,相对标准偏差(RSD)为3.4%。用此方法检测婴儿配方奶粉中乳铁蛋白,操作简单,结果准确可靠,精密度高,重现性好。     

貉源犬瘟热病毒CDV-ZC株分离鉴定、全基因测序与分析

应用非洲绿猴肾细胞(Vero)从山东省诸城市疑似犬瘟热(canine distemper,CD)感染貉的肝脏、脾脏、肺脏等组织病料的研磨上清液中分离出1株病毒。分离株经Vero细胞传至第4代出现典型的细胞病变效应(CPE),经毒力测定、血清学、RT-PCR检测及测序、回归动物试验证明为犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV),命名为CDV诸城分离株(CDV-ZC)。采用RT-PCR方法分段克隆分离株的全基因序列并测序,测序成功的各序列依次拼接得到全基因序列并进行序列比对。结果表明,CDV-ZC株全基因(KJ994343)与标准美洲型犬瘟热强毒株A75/17核苷酸同源性高达96.5%,而与疫苗株Onderstepoort、CDV3等亲缘关系较远,同源性为91.6%~92.0%。血凝素(H)基因序列分析表明,CDV-ZC株与国内野毒株LN(13)2、GP株等以及日本野毒株UENO、HAMA等共同归属于Asia-1型,在H蛋白信号淋巴细胞激活因子(SLAM)受体结合区即542~544位增加了1个潜在N-连接糖基化位点(N-X-S/T)。致病性强毒株CDV-ZC的成功分离及全基因序列测定加深了我们对当前中国CDV流行株遗传变异情况的了解,为CD的有效预防、诊断及控制提供理论依据。     

鮰爱德华菌外膜微孔蛋白ompN1、ompN2和ompN3基因生物信息学分析及截段基因的原核表达与其抗原性检测

根据GenBank中鮰爱德华菌(Edwardsiella ictaluri)外膜微孔蛋白N(outer membrane porin protein,OMP)基因序列(NC_012779.2)设计引物,以鮰爱德华菌Ms12基因组DNA为模板,经PCR扩增后克隆至pMD19-T载体,将阳性克隆菌送公司测序。测序结果通过生物信息学软件对ompN1、ompN2和ompN3序列的氨基酸序列相对分子质量、分子式、信号肽、跨膜区、亲/疏水性、B细胞表位进行预测,并构建系统发育树;根据去信号肽的B细胞表位相对集中区域设计特异性引物,经PCR扩增后,将截段序列克隆至pMD19-T载体,鉴定成功后克隆至原核表达载体pET32a(+)并转化至BL21(DE3)/Rosseta(DE3)进行IPTG诱导表达,最后用兔抗鮰爱德华菌血清对重组蛋白OmpN1、OmpN2和OmpN3进行免疫原性检测。结果显示扩增得到ompN1(1 143bp)、ompN2(1 056bp)和ompN3(1 053bp)的序列,获得的基因登录号分别为KJ831564、KJ831565和KJ831566。经生物信息学分析显示,OmpN1、OmpN2和OmpN3蛋白分子式分别为C1940H2993N543O622S7、C1817H2723N497O579S5和C1896H2843N519O563S7,相对分子质量大小分别为44 100、40 900和41 800,均为含有1个信号肽和跨膜区的疏水性蛋白,具有1个革兰阴性细菌OM_channels超家族结构域,是1种嵌入型的膜外蛋白;SDS-PAGE电泳检测发现,诱导表达的融合重组蛋白均以包涵体的形式出现在沉淀中,大小分别约为61 800、58 700和59 100;Western-blot分析表明,重组蛋白OmpN1、OmpN2和OmpN3均能与兔抗鮰爱德华菌全菌血清结合,表明鮰爱德华菌外膜微孔蛋白N具有亚单位疫苗开发的潜力。